基因型

MATα; leu2-3,112; trp-901; his3Δ200; ade2-101;cyh2R;can1R ; gal4Δ; gal8Δ; GAL1::lacZ;HIS3UASGAL1::HIS3@LYS2; SPAL10::URA3

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

MAV203菌株是life公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株，MATα型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒操作進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫(kù)試驗(yàn)。MAV203有四個(gè)報(bào)告基因：Ura，HIS，Trp，Leu。MAV203感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μgDNA。

操作說(shuō)明

1、取一支無(wú)菌的1.5ml EP管，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-3µg，Carrier DNA 10µl(95-100 度5min 快速冰浴，重復(fù)一次)，100µl冰上融化的感受態(tài)細(xì)胞，PEG/LiAc 500µl，輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次； 

2. 30℃水浴30min，每10min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

3. 每支加入20µl的二甲基亞砜；（用于提高轉(zhuǎn)化效率,可不做）

4. 42℃水浴15min，每5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次；

5. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，每支加入1ml的YPDPlus于30℃復(fù)蘇1h；（用于提高轉(zhuǎn)化效率，可不做）

6. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清，用100µl 0.9%NaCl重懸，涂板，30℃培養(yǎng)48-96h。

注意事項(xiàng)

1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。

2. PEG溶液在低溫環(huán)境下會(huì)析出，請(qǐng)于常溫下溶解后使用。