TG1 Chemically Competent Cell

基因型：

F′ traD36 proAB lacIqZΔM15]supE thi-1Δ(lacproAB)Δ(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

TG1來(lái)源于E. coli K-12菌株，是目前生長(zhǎng)速度最快的克隆用大腸桿菌菌株，在平板上37℃，7h可見克隆。主要的噬菌體展示用菌株，同時(shí)也可用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建，lacIqZΔM15的存在使其可以用于藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn)；但不含核酸酶endA1突變，體內(nèi)核酸酶含量較高，提取質(zhì)粒時(shí)推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中去蛋白液以去除菌體內(nèi)大量的核酸酶。High5TM系列TG1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×109cfu/μg。

操作說(shuō)明：

1.TG1感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的2YT或LB無(wú)菌培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒，否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。 

2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。 

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。