基因型：

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1recA1 hsdR17(rk- ,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA

簡(jiǎn)要說(shuō)明：

DH5α λpir 菌株來(lái)源于 DH5α，在 DH5α 大腸桿菌基因組中引入 LAMpir，即為 DH5α λpir，該菌株可以表達(dá)PIR 蛋白，使得含有 R6Kg ori 復(fù)制子的質(zhì)粒可以在其中正常復(fù)制。 DH5α λpir 菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質(zhì)粒 DNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入 DNA 的穩(wěn)定性； lacZΔM15 的存在使 DH5α 可用于藍(lán)、白斑篩選；但 DH5α λpir 菌株生長(zhǎng)速度較慢，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng) 延長(zhǎng)生長(zhǎng)時(shí)間。 DH5αλpir 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×109 cfu/μg DNA。

操作說(shuō)明：

1.DH5α λpir 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并 用手打 EP 管底混勻，冰中靜置 25 分鐘。

2.42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無(wú)菌LB培養(yǎng)基，混勻后 37℃，200 rpm 復(fù)蘇 70 分鐘。

4. 5000 rpm 離心 1 分鐘收集菌體，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 LB 培養(yǎng)基上。5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱至少 18 小時(shí)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中 8 分鐘內(nèi)加入目標(biāo) DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降 低轉(zhuǎn)化效率

2. DH5α λpir 菌株生長(zhǎng)緩慢，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)菌體生長(zhǎng)時(shí)間（37℃，18 小時(shí)以上）。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。